Anticuerpos antinucleares- Resumen Kelley Rheumatology

Anticuerpos antinucleares

Se usan células Hep-2 (lineas de células epiteliales humanas derivadas de carcinoma laríngeo)

Positivo >1:160

Lectura se inicia con diluciones de 1:40

Valores >1:640 sugiere enfermedad autoinmune

<1:80 es poco sugestivo de enfermedad autoinmune, excepto  Les con títulos bajos o sanos con títulos altos

ANA 1:320 (3% de la población)

ANA 1:40 32% de la población

LES: Solicite Anti-DNAds, Anti-SM, Anti U1, snRNP, anti Ro, anti La

Esclerodermia, EMTC, polimiositis: anti-topoisomerasa 1, anticentromero, anti –U1 snRNP o anti tRNA sintetasa

Sjogren: antiRo, AntiLA

Anas positivos no LES: inducido por medicamentos (hidralazina, isoniazida, clorpromazina), infecciones crónicas, enfermedad hepática crónica, otras enfermedad autoinmunes, edad avanzada.

Tipos de patrones en ANAs

Homogéneo o difuso: sugestivo de LES o LES por medicamentos sin esta en títulos >1:640.

-AntidsDNA, histone, anti Mi-2, atiScl-70, antiTRNA sintetasas (Jo-1, PL-7, PL-12, EJ, OJ, KS, Mas)

Periférico o en anillo: en títulos altos es casi exclusivo de LES

            -AntidsDNA, histone

Moteado: menos especifico, se encuentra LES, ETC, esclerosis sistémica, AR, Sjogren y otros

            antiSm, antiRNP, antiRO, antiLA, Kinetocoro (centromero), p80-coilina, MA-I

Nucleolar: esclerosis sistémica. LES en <5%

            AntiKu, RNAP, RNP ribosomal, antiScl-70

Centromerico: CREST, Raynaud, esclerosis difusa, cirrosis biliar primaria, LES y AR

Citoplasmático: Miopatías inflamatorias, hepatopatías y LES

            Difuso: sugestivo de antiP ribosomal

            Moteado fino o difuso: anti Jo-1 o anti tARN sintetasa

            Moteado discreto: contra endosoma temprano y antilisosomas

            Granular: ati M2 contra complejo piruvato deshidrogenasa en CBP

ANAs en LES:

Se pueden clasificar en dos (anti cromatina y antígenos RNP)

Antígenos asociados a cromatinas

-AntiDNA: dsDNA: muy especifico de LES, ocasionalmente en AR, Sjogren y hepatitis autoinmune.

ssDNA: poca utilidad dx, esta en LES y otras entidades

40-70% de LES activo, especialmente en enfermedad renal, fluctúa con actividad y se asocia con hipocomplementemia. Cambios se correlacionan con riesgo de nefritis y inversamente proporcional con C3

Posiblemente contribuyan directamente a la enfermedad renal por la formación de complejos inmunes, fijación del complemento, reactividad cruzada con antígenos renales o toxicidad celular directa

Se pueden observar durante terapia con anti TNF. Puede reaccionar cruzado con otros antígenos tales como el receptor neuronal de NMDA o P-ribosomal en SNC

-Antihistona (nucleosoma): Contra componentes proteicos de los nucleosomas, comunes en lupus, asociado con antidsDNA. Se pueden ver en miositis, esclerosis sistémica, infecciones crónicas como EBV.

70-80% de los pacientes con LES y 95-100% de los pacientes con LES inducido por medicamentos. Bastante especifico de LES. Positivo en 30% de los pacientes con LES con antiDNA negativo

-otros autoantigenos asociados a cromatinas: Observados también en otras enfermedades reumáticas y no reumáticas con significado clínico incierto.

Acx contra p70 y p80 del Ku (subunidad de PK dependiente DNA implicada en repación), acs anti RNA polmerasa 2. Se ha asociado con Raynud, artralgia, engrosamiento de la piel y reflujo GE.

P70: Esclerosis-polimiositis sobreposición

P80 : Esclerosis y lupus

Anti-Ku: Descrito en el síndrome de sobreposición escleroderma/miositis en japoneses y en EMTC. Positivo 10-15% con LES.

Antiribonucleoproteínas

-AntiSM/anti U1RNP: Sm es especifico de LES, está en el 20-30% de los pacientes, gran significado si el antiDNA es negativo. Se asocia con enfermedad renal leve, síndrome cerebeloso orgánico y exacerbaciones de LES. Si se asocia al RNP parecer proteger de enfermedad renal

El U1-RNP es sugestivo de EMTC. Se encuentra en LES en 30-40% de los pacientes. Se asocia a miositis, fenómeno de Raynaud, hipomotilidad esofágica, leucopenia, artralgia o artritis, esclerodactilia y EPID. Títulos bajos: esclerosis sistémica, Sjogren, AR.

Partículas de RNP están involucradas en el splicing del RNA pre-mensajero. Incluyen  U1, 2, 4/6, 5, 7, 11 Y 12 que consiste de RNA nuclear pequeño rico en uridina y un set de polipéptidos incluyendo un core de polipéptidos SM (B/B`, D1, D2, D3, E, F, G)

Acs antiSM son contra este core de SM.

-AntiRo/AntiLA:

Son partículas RNP parte de complejos macromoleculares que procesan transcriptos de polimerasa sde RNA III.

Ro en títulos altos en 60-80% del Sjogren primario, 10-15% de Sjogren por AR.

 25-40% de los LES especialmente el cutáneo subagudo, chillblain lupus, fotosensibilidad, síntomas secos, neonatal con bloqueo cardiaco, síntomas secos, factor reumatoide, asociado a deficiencia de C4, enfermedad pulmonar, linfopenia, trombocitopenia y fibroelastosis cardiaca.

50% antiRO tienen antiLA. Raro tener anti LA sin anti RO.

Anti Ro52kd sin antiRo 60kd se correlaciona con Sjogren, ambos o antiRo60kd es con lupus

AntiLA 50% de los sjogren, 10-15% con LES, LES de inicio tardío y raro en otras enfermedades del tejido conectivo. Positivo en algunos con CBP y hepatitis autoinmne.

Quienes: LES en embarazo, fotosensibilidad inexplicable, LES con ANAS negativos y sospecha de Sjogren

-Anti-P ribosomal: AntiP. Objetivo proteínas P0, P1, P2 de la subunidad ribosomal 60S

Altamente especifico de Les, 10-20% de los pacientes. Relacionado con psicosis y depresión, ocasionalmente con nefritis, compromiso hepático y actividad de la enfermedad.

ANAS en esclerosis sistémica:

Típicamente son contra antígenos nucleolares. La mayoria moteados, son positivos en el 97% de los pacientes. El suero usualmente contiene autoanticuerpos monoespecíficos contra el kinetocoro, topoisomera I o polimerasas de RNA.

Positivos en el 60-90% de los pacientes

-Anticentromero: Acs contras al menos 4 antigenos del centromero (CENP-A, B, C y D9

>10%, mas especifico de las esclerosis forma limitada o CREST(57%). Se encuentran en Raynaud, LES, AR, Sjogren y cirrosis biliar primaria. Otras asociaciones con compromiso en piel limitado, telangiectasias, enfermedad vascular o pulmonar y aumento en el riesgo de malignidad

-Anti-topoisomerasa 1 (Scl-70): Contra la región catalítica de la DNA helicasa topoisomerasa 1.  22-30% de esclerosis sistémica con compromiso de piel proximal, , asociado a fibrosis pulmonar y con compromiso cardiaco y renal, enfermedad de larga duración, cáncer, cicatrices digitales

-AntiARN polimerasas: 20% de los pacientes con forma difusa de la enfermedad, I y III son mas específicos y pueden ser útiles en el dx o predicción de crisis renal

RNAp III predice esclerosis sitemica cutánea difusa con puntaje de piel elevado.

-AntiPM-Scl: Contra los componentes PM-Scl100 y PM-Scl.75 del exosoma (complejo que regula el RNA ribosomal). 3% de los pacientes con escleroderma. Esta asociado a sindrome esclero-dermatomiositis.  Alta incidencia de compromiso muscular, tendinoso y renal., Se asocia con artritis y comproiso en piel en dermatomiositis, calcinosis, manos de mecánico y eczema.

Otros:

-AntiTh ribonucleoproteina nuclear: Se encuentra en 4-16% de los pacientes con la forma localizada de la enfermedad. A veces se asocia a hipotiroidismo. Puede predecir HTYP, enfermedad cutánea liitada, dedos puffy, compromiso en interstino delgado, disminucionen artralgias y artritis

-Antifibrilarina: 6-8% de los pacientes, asociado con forma difusa con compromiso pulmonar, muscular y cardíaco. Contra U3 RNP pequeño

Antitopoisomera 2: HTP y escleroderma localizado

-Anti fosfoproteína nucelar B23: HTP y anticpueros antifibrilarina

-AntiRNAP II trasncription  activator Sp1: Fenomeno de Raynaud y enfermedad indiferenciada

-Anti NOR90

ANAS en miopatía inflamatoria:

Positivos en el 40-80% de los pacientes

Especificos

-Anti-tARN sintetasa: dirigido contra la aminoacil tARN sintetasa, se asocia con el sindrome antisintetasa miositis (dermato o polimiositis): (EPID, artritis y fenómeno de Raynaud, manos de mecánico, líneas hipequeratoticas, esclerodactilia, Telangiectasia facial, calcinosis y sicca, con un pobre pronostico) AntiKS: relacionado con EPID y artritis inflamtoria o con EITC mas que con miositis

-AntiJo1: se encuentra en el 20-30% de las polimiositis y en 10% de DM. Asociado con EPID

-AntiMi-2: 13-21% con DM y manifestaciones dermatológicas (shawl y V)

Sobreposición:

-AntiSRP (anti partículas de reconocimiento) 7-9% de los casos usualmente es miositis grave, compromiso cardiaco.

-Anti-snRNP: EMTC o Les con miositis, miositis-escleroderma y cx indiferenciasdas. U2 snRNP: miosis y esclerodactilia, a veces con LES y sin EPID.

-AntiPM-Scl: 10% de los pacientes con PM-escleroderma y con artritis, lesiones en piel de DM; calcinosis, manos de mecánico y eczema

ANAS en Sjogren

40-96%

AntiRO: 40-95%, asociados con manifestaciones extra-glandulares

antiLA 87% asociados con manifestaciones  extraglandulares y asociación con Anti Ro y factor reumatoide

Acs anti alfa fodrina: 64-67%. Poco comunes en otras enfermedades del tejido conectivo. Asociaciones preliminares con  manifestaciones extraglandulares

Acs beta fodrina: 70% sin asociaciones clínicas

ANAS en EMTC y sobreposición

Universales en estas enfermedades

EMTC requiere antiRNP ANA usualmente >1:1000 y frecuentemente >1:10000. Muchos se desarrollan en una enfermedad especifica

Otras enfermedades

Fenomeno de Raynud 19-30% . riesgo de enfermedad autoinmune

Artritis juvenil: predice desarrollo de uveítis

APS: predice LES

Otras: vasculiides, sarcoidosis, esclerosis múltiples, EII, infecciones

Enfermedades no autoinmunes:  antígeno DFS70: (dense fine speckles 70, lens epithelium derived

ANAs

Sentido estricto son acs contra ag específicos nucleares (DNA o snRNP)

Uso de FANA ha aumentado el espectro a antígenos nucleolares y citoplasmáticos

Enfermedades con ANAS positivos

1. Enfermedades en los los ANAS con utiles para el Dx

Lupus                                                             99-100%

Esclerosis sistemica                                        97%

Polimiositis/dermatomiositis                           40-80%

Sjogren                                                                       48-96

2. Enfermedades para los que se requiere ANA en el dx:

Lupus inducido por fármacos                        100%

EMTC                                                            100%

Hepatitis autoinmune                                     100%

3. Enfermedades para las cuales son útiles para el pronostico

Artritis reumatoide juvenil                              20-50%

Sindrome antifosfolipido                               40-50%

Fenomeno de Raynaud                                              20-60%

4. Enfermedades sin utilidad en el uso de ANAS
Lupus eritematoso discoide                            5-25%

Fibromialgia                                                   15-25%

Artritis reumatoide                                         30-50%

Familiares de pacientes con colagenosis                    5-2%

Esclerosis multiple                                         25%

Purpura trombocitopenica idiopática              10-30%

Enf tiroidea                                                    30-50%

Implantes de silicona                                      15-25%

Enfermedad infecciosasas                              variable

Malignidad                                                     Variable

5. Individuos sanos:

≥1:40               20-30%

≥1:80               10-12%

≥1:160             5%

≥1:320             3%

Historia:

1948: Células LE. Fagocitos con células anucleadas fagocitas, secundaria  apoptosis induca por acs contra deoxiribonucleoproteina

1957: IFI permito desarrollo de FANA

Metodos de detección:

-Inmunofluorescencia:

1. Sustrato celular: usualmente células Hep2 (previamente tejido murido)

2. Suero a evaluar en varias diluciones

3. FITC-antiIgG

4. Evaluación por microscopia de luz

Reportes: titulo y patrón.

Positivo 1:40

Practivas técnicas:

1. Suero a 4 C por 72 horas o a -20c

2. Celulas Hep2 fjas con acetonas

3. Usar FITC

4. Uso de suero referente de la OMC o CDC

-ELISA
1. Suero del paciente

2. Platos cubiertos con el antígeno purificado

3. Acs antiIg humana con enzima

4. Sustrato enzimático con color

Test anticuerpos antiDNA

Problemas: DNA se desnaturaliza y pierde la ds.

1. Radioinmunoensayo de Farr: (gold standard)

Unión de acs a DNAds radiomarcado. Los complejos dsDNA-Abs se precipitan con sulfato de amonio y permiten cuantifiacion del complejo.

2. Test de Crithidia:

Hemoflagelado Crithidia luciliae (sustrado de dsDNA) usado en IFI

Contiene un kinetoplasto rico en dsDNA sin RNA o proteínas nucleares contaminantes

3. ELISA

Otros test especializados:

Inmunodifusión, contrainmunoelectroforesis, inmunoprecipitaciòn, inmunoblot, ensayos de inhibión enzimática.